LC-dsDNA合成服務

科研服務

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質粒DNA作為基因遞送的非病毒載體，在傳染性疾病預防性疫苗、腫瘤治療、蛋白替代治療等領域有著廣泛應用。但治療性質粒DNA亦面臨一些難題，如質粒DNA存在整合到靶標細胞基因組上的風險；質粒DNA序列上存在的CpG基序可能具有免疫刺激效應；存在于人體中的細菌可能會發(fā)生質粒轉化，導致質粒DNA復制，從而使體內細菌產生耐藥性；此外，用限制性內切酶切割或PCR擴增獲得的僅含有轉錄單位的DNA片段，遇到核酸外切酶極易發(fā)生降解。

LC-dsDNA（Linear, covalent closed, double strand DNA），即線性共價閉合雙鏈DNA，在兩端具有自由的、非連接的3' 和5'末端，是一種小的、線性雙鏈共價閉合DNA 結構。LC-dsDNA不攜帶骨架信息，僅表達目的基因，分子量小，細胞轉染效率高；且在抗原的表達及小鼠體內能夠觸發(fā)的體液免疫和細胞免疫的水平媲美質粒DNA疫苗達到的效果，可以提供有效的抵抗病毒感染的保護效力。將 LC-dsDNA 導入目標細胞中，可實現(xiàn)對細胞內特定基因的引入和表達，在臨床應用及安全性上有較大優(yōu)勢。

與傳統(tǒng)DNA質粒相比，LC-dsDNA具有以下優(yōu)勢：

1)剔除質粒骨架及無關外源序列，降低風險，安全性更高；
2)降低CpG基序，降低觸發(fā)免疫反應的風險；
3)不受質粒骨架拷貝數(shù)影響，產量更高；
4)在哺乳動物體內表達更好，每次轉染所需DNA量更少。

與PCR擴增或酶切獲得的DNA片段相比，LC-dsDNA 3’末端自身環(huán)化，形成共價閉合結構，免受核酸外切酶攻擊，穩(wěn)定性更高。

通用生物擁有專業(yè)的基因及質粒生產、工藝開發(fā)團隊，在科研級LC-dsDNA定制合成方面具有豐富的經驗，可提供從基因合成、質粒制備、LC-dsDNA合成一站式服務。可合成制備200-8000 bp LC-dsDNA ，并可針對不同的下游應用進行優(yōu)化定制。交付的產品具有高產量、高純度、低雜質殘留等特點，可應用于核酸（DNA、mRNA）疫苗及藥物研發(fā)、細胞與基因治療（GCT）等諸多領域的早期研究階段。

服務內容

服務步驟	服務內容	周期	交付內容
1.基因合成及質粒制備	基因合成、質粒構建	1-2周	a) LC-dsDNA產品 b) COA 文件 c) 序列驗證文件
1.基因合成及質粒制備	質粒抽提	1-2周
2.LC-dsDNA合成	體內或體外合成	3-4周
2.LC-dsDNA合成	純化回收	3-4周
3.質控	默認QC+額外QC項（可定制）	詳詢

QC項目

QC	項目	檢測方法
默認	外觀	目測
	LC-dsDNA產品序列完整度	瓊脂糖凝膠電泳
	序列準確性	DNA模板Sanger 測序
	LC-dsDNA DNA濃度	Nano drop定量
	A260/280	Nano drop定量
	內毒素含量	凝膠鱟試劑法
	生物負載	TSA 48h平板檢測
額外（可選）*	模板DNA殘留	qPCR
	蛋白殘留	ELISA法；BCA蛋白定量；Qubit法（可選）
	DNA酶殘留	DNase檢測
	純度	CE/HPLC