試劑產(chǎn)品

產(chǎn)品介紹

本產(chǎn)品是2×Mix預混合試劑，染料法進行 qPCR 的專用試劑，能夠?qū)崿F(xiàn)在單個反應孔中進行熒光定量PCR反應。本產(chǎn)品含有熱啟動Taq酶、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+等，本產(chǎn)品對反應緩沖體系進行了深度優(yōu)化，能夠提高反應的擴增效率， 促進低濃度模板的有效擴增，可以進行高靈敏度的 PCR 反應。本產(chǎn)品針對不同品牌型號的熒光定量PCR 儀，分別提供不同濃度的Rox 參比液（High Rox/Low Rox），用于校正孔與孔之間的熒光信號誤差。

反應體系

組分 體積（ul） 終濃度
GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 10 1×
Forward Primer（10uM） N 0.1-0.5uM
Reverse Primer（10uM） N 0.1-0.5uM
50×High or Low Rox 0.4 1×
Template 1-5 -
ddH2O up to 20ul -

參考程序

循環(huán)步驟 溫度 時間 循環(huán)數(shù)
預變性 95℃ 1-2min 1
變性 95℃ 5-15s 40
退火/延伸 60℃ 30s
溶解曲線階段 根據(jù)儀器默認程序設(shè)置 1

適用機型

High Rox 適用機型： ABI 5700, 7000, 7300, 7700,7900HT ,7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus.

Low Rox 適用機型：  ABI 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 1Plus/3/5/6 Flex/7 Flex/12k Flex;
Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000.

不需要Rox 校正的儀器型號：
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied ScienceLightCycler 2.0; Lightcycler 96 ,LightCycler 480;
Thermo Scientific PikoReal Cycler;
Cepheid SmartCycler;
Illumina Eco QPC;
Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4.

注意事項

  • 擴增曲線：標準的擴增曲線為S 型。

    • 1)   Ct 值在20-30 之間時，定量會分析比較準確，超出范圍可對模板進行調(diào)整；

    2)   Ct 值在35以上 時，檢測結(jié)果無法定量分析基因的表達量，但可用于定性分析。

  • 熔解曲線：

    • 熔解曲線為單峰，說明反應特異性好可以進行定量結(jié)果分析；如果熔解曲線出現(xiàn)雙峰、多峰，則不能進行定量分析。熔解曲線為雙峰，需要通過瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標峰是引物二聚體還是非特異性擴增， 如果是引物二聚體，需要降低引物濃度，或者重新設(shè)計擴增效率較高的引物。如果是非特異性擴增，則需要提高退火溫度，或者重新設(shè)計高特異性的引物。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 單位 目錄價格(RMB)
KQRM1-1 GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 1ml 支 200
KQRM1-3 GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 3ml 支 500
KQRM1-5 GUeasy Taq SYBR Green qPCR Master Mix 5ml 支 800

訂購信息

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