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微衛(wèi)星標記（Microsatellite）也稱為短串聯(lián)重復序列（STR）或簡單重復序列（SSR），是廣泛分布在真核生物基因組中的簡單重復序列，一般由一個長2～6bp的核心序列經(jīng)多次串聯(lián)重復排列而成，重復次數(shù)大多在10～60次之間。微衛(wèi)星中重復單位的數(shù)目存在高度變異，這些變異表現(xiàn)為微衛(wèi)星數(shù)目的整倍性變異或重復單位序列中的序列有可能不完全相同，因而造成多個位點的多態(tài)性。SSR標記能很好地將這些變異揭示出來，不同的SSR在不同的種甚至不同個體間的多態(tài)性。由于基因組中某一特定的微衛(wèi)星的側(cè)翼序列通常都是保守性較強的單一序列，因而可以將微衛(wèi)星側(cè)翼的DNA片段克隆、測序，然后根據(jù)微衛(wèi)星的側(cè)翼序列就可以人工合成引物進行PCR擴增，從而將單個微衛(wèi)星位點擴增出來。由于單個微衛(wèi)星位點重復單元在數(shù)量上的變異，個體的擴增產(chǎn)物在長度上的變化就產(chǎn)生長度的多態(tài)性，這一多態(tài)性稱為簡單序列重復長度多態(tài)性(SSLP)，每一擴增位點就代表了這一位點的一對等位基因。由于SSR重復數(shù)目變化很大，所以SSR標記能揭示比RFLP高得多的多態(tài)性。STR分型高效快捷，結(jié)果精確，是非常重要的遺傳標記，在基因定位、遺傳育種等領域有著廣泛的應用。

產(chǎn)品內(nèi)容

項目類型 STR遺傳標記分析服務價格
位點調(diào)試費 位點檢測費
STR分型 300元/位點 5元/位點/樣本

檢測技術

微衛(wèi)星位點通常通過PCR擴增和電泳檢測，并根據(jù)片段大小分離等位基因進行分析；擴增后的等位微衛(wèi)星可以用多種方法檢測，傳統(tǒng)方法采用聚丙烯酰胺凝膠電泳加放射顯影或銀染的方法，費時費力效率低。利用ABI遺傳分析儀對熒光標記的DNA片段進行檢測，結(jié)合分子量內(nèi)標進行DNA片段長度計算，使STR分型變得高效快捷，結(jié)果也更加精確?；跍y序儀平臺，我公司同時提供的全套微衛(wèi)星（STR、SSR）分型服務，包括MSI、LOH分析等。

實驗流程

  • 實驗方案的設計，包括熒光標記的選擇，引物的設計、合成和標記、內(nèi)標的選用等。
  • 預實驗：確定PCR反應條件。
  • 正式實驗：完成熒光PCR，并在測序儀上完成電泳掃描，數(shù)據(jù)采集，去掉低值數(shù)據(jù)，分析結(jié)果、補充測序、完成分析。
  • 對收集的數(shù)據(jù)進行處理分析，提供產(chǎn)物片段大小、數(shù)量多少的信息數(shù)據(jù)。

樣品要求

  • DNA樣品：濃度≥50ng/μl、體積≥20μl的總DNA樣品，DNA抽提：血液20元/樣本；新鮮組織30元/樣本；石蠟包埋組織50元/樣本；
  • 血液樣品：請?zhí)峁?00μl抗凝血；采用標準的采樣管，抗凝劑推薦使用EDTA；
  • 組織樣品：請?zhí)峁┳懔康慕M織樣品（≥300mg）；
  • 細胞（≥106 ）；
  • STR位點信息： STR位點上下游各200bp的確切序列及STR位點的信息；

提供結(jié)果

  • 實驗過程及其涉及的電泳圖、測序峰型圖；
  • 擴增和反應體系所設計的引物序列；
  • 客戶所需的其他資料。

參考資料

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  • Nopparat Buahom, Yu Du, Yi Wu, Yuliang Deng, Xiaolong Jiang, Wei Fu, Zhihong Li. Polymorphic microsatellite markers in the guava fruit fly, Bactrocera correcta (Diptera: Tephritidae).
  • Xiang-Qin Yu, Qiao-Ming Li. Isolation and characterization of microsatellite markers for a worldwide invasive weed, Chromolaena odorata(Asteraceae). 7.Construction of a primary DNA fingerprint database for cotton cultivars. Genetics and Molecular Research 12 (2): 1897-1906 (2013).

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