試劑產(chǎn)品

2×GenRec 單段重組試劑盒是一款簡(jiǎn)單、快速、高效的單片段DNA定向克隆產(chǎn)品，本試劑盒可以將PCR產(chǎn)物定向克隆至任意載體的任意位點(diǎn)。將載體在克隆位點(diǎn)進(jìn)行線性化，并在插入片段PCR引物5'端引入線性化克隆載體末端序列，使得插入片段PCR產(chǎn)物5'和3'最末端分別帶有和線性化克隆載體兩末端對(duì)應(yīng)的完全一致的序列(20 bp～40 bp)。將這種兩端帶有載體末端序列的PCR產(chǎn)物和線性化克隆載體按一定比例混合，在重組酶的催化下，僅需反應(yīng)15-30 min即可進(jìn)行轉(zhuǎn)化，完成定向克隆。克隆陽(yáng)性率可達(dá)90%以上。試劑盒中預(yù)混了重組酶和重組反應(yīng)所需緩沖液，并添加了特殊成分，可顯著提高重組克隆效率。


產(chǎn)品組成：

2×GenRec Master Mix

產(chǎn)品特點(diǎn)：

  • 簡(jiǎn)單高效的定向無縫克隆
  • 靈活的序列設(shè)計(jì)，無需考慮酶切位點(diǎn)
  • 無需PCR純化步驟

產(chǎn)品說明

使用說明:

1、反應(yīng)體系

注：如果不慎將液體粘在管壁，可通過短暫離心使其沉入管底。

片段添加量（ng）= 0.02×片段堿基對(duì)數(shù)（bp）（對(duì)應(yīng)的片段濃度為0.03 pmol）

2、重組反應(yīng)

  • 在冰上解凍2×GenRec Master Mix，顛倒混勻。
  • 在無菌管中加入載體和片段（按上述要求），用無菌水補(bǔ)足到10μL，最后加入10 μL 2×GenRec Master Mix，用移液器輕輕吸打混勻避免氣泡產(chǎn)生。
  • 50℃恒溫反應(yīng)15-30min，在冰上放置3-5min

3、轉(zhuǎn)化

  • 取化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞于冰上解凍。
  • 取上述反應(yīng)液10 μL加入到感受態(tài)細(xì)胞中充分混勻。冰浴10min。
  • 將離心管置于42℃水浴鍋中熱激90s，然后迅速放回冰上，使細(xì)胞冷卻2～3min。
  • 向離心管中加入已預(yù)熱的無菌LB(或SOC)培養(yǎng)液600μL，37℃恒溫振蕩培養(yǎng)45～60min。
  • 短暫離心棄上清，吸取100 μL的新鮮LB培養(yǎng)基重新懸浮，將菌液均勻涂布在含有適當(dāng)抗生素的平板上。將平板倒置，于37℃過夜培養(yǎng)。

4、 克隆鑒定

菌落PCR。用無菌的槍頭或牙簽將單個(gè)菌落挑至20～50μL LB 培養(yǎng)基中混勻，直接取1μL作為PCR模板，使用2×Taq DNA Polymerase Master進(jìn)性菌落PCR實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):

  • 為達(dá)到最優(yōu)的重組效果，請(qǐng)保證體系中PCR片段和載體的質(zhì)量，建議DNA樣品A260/280>1.8，濃度>40ng/μl。
  • 當(dāng)?shù)玫降腜CR產(chǎn)物條帶單一時(shí)，可無需純化，產(chǎn)物可直接用于重組。
  • EDTA等金屬離子螯合劑對(duì)該產(chǎn)品有抑制作用，必須保證反應(yīng)體系中不含該類螯合劑。

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品名稱 目錄號(hào) 規(guī)格 價(jià)格
2×GenRec 單段重組試劑盒 CL07010 10次 ￥375元
CL07020 20次 ￥625元
CL07050 50次 ￥1000元
說明書

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