藥物研發(fā)CRO/CDMO

牛痘病毒來源的mRNA加帽酶活性亞基，可以特異性在RNA分子的5’端加上“帽子結(jié)構(gòu)”。在真核生物中，該結(jié)構(gòu)與 mRNA 的穩(wěn)定、轉(zhuǎn)運和翻譯密切相關(guān)。使用酶促反應(yīng)為 RNA 加帽是一種簡單有效的方法，能顯著改善用于體外轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)染和顯微注射的 RNA 的穩(wěn)定性和翻譯能力。

mRNA疫苗是當(dāng)前市場關(guān)注最高的領(lǐng)域之一，mRNA技術(shù)在預(yù)防性疫苗、腫瘤疫苗和蛋白替代療法等方面都將逐步有產(chǎn)品上市。在mRNA產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，加帽酶是極為重要的生產(chǎn)原料。mRNA生產(chǎn)中加帽步驟所需原料占比31%，2035年預(yù)計會有10.3億美元的市場規(guī)模。

通用生物擁有成熟完善的蛋白研發(fā)制備平臺，在蛋白領(lǐng)域積累了大量的研發(fā)經(jīng)驗和專利。憑借自有原料關(guān)鍵技術(shù)及自主蛋白生產(chǎn)專利技術(shù)，平臺可研發(fā)篩選穩(wěn)定性、活性、產(chǎn)量俱佳的新型mRNA加帽酶，已建立了年產(chǎn)50億人份加帽原料酶生產(chǎn)線，可滿足mRNA加帽反應(yīng)市場需求。

制備路線：

  • 1） 利用DNA隨機突變技術(shù)，構(gòu)建高容量酶庫
    • 利用改良后的易錯PCR技術(shù)，構(gòu)建107pfu容量的牛痘病毒mRNA加帽酶庫，為優(yōu)篩選優(yōu)質(zhì)牛痘病毒mRNA加帽酶提供充足備選酶。通過優(yōu)化反應(yīng)條件，將易錯PCR突變率提高至0.1%，較之原有技術(shù)，庫容提高了5倍，提高獲得有益突變體的概率。
  • 2） 利用熒光偏振技術(shù)，小分子與蛋白偶聯(lián)技術(shù)，熒光基團標(biāo)記肽核酸技術(shù)，核苷酸與肽核酸構(gòu)建穩(wěn)定雙鏈技術(shù)等，建立高通量檢測牛痘病毒mRNA加帽酶活性體系。
    • 利用熒光偏振技術(shù)，將牛痘病毒mRNA加帽酶活性，轉(zhuǎn)化為熒光信號，實現(xiàn)高通量分析。
    • 利用肽核酸鏈與核苷酸鏈配對形成雙鏈，提高了核苷酸鏈對酶活分析過程中各種核酸酶的耐受性，提高分析結(jié)果的可信度。

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