科研服務(wù)

TA克隆技術(shù)（TA cloning）利用Taq聚合酶具有末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）活性，但卻不具有3'-5'端外切酶校準(zhǔn)活性的特點(diǎn)，可在PCR產(chǎn)物的3'端加上一個非模板依賴堿基“A”。pMD18-T是一種高效克隆PCR產(chǎn)物的專用載體，它是由pUC18載體在Xba I和Sal I識別位點(diǎn)間插入一個EcoR V位點(diǎn)，然后用EcoR V進(jìn)行酶切使質(zhì)粒線性化，并在它的3'端添加“T”構(gòu)建而成。因其3'端帶有一個突出的“T”尾，能高效地與帶“A”尾的PCR產(chǎn)物連接，極大地提高了克隆的效率。TA克隆是目前克隆PCR產(chǎn)物最簡便、快捷的方法。

產(chǎn)品內(nèi)容

插入片段大小 交貨周期 價格(元) 備注
< 800 bp 5個工作日 200元/個
800～2000 bp 7個工作日 請?jiān)儍r

服務(wù)說明

  • 請?zhí)峁┛寺∑蔚南嚓P(guān)信息，包括名稱，大小、樣品是否帶有”A”尾以及PCR產(chǎn)物是否已純化。
  • 已純化的PCR產(chǎn)物請確保使用的溶劑為滅菌的雙蒸水。
  • 請?zhí)峁舛取?0ng/μl,總體積≥50μl的PCR產(chǎn)物，所需DNA的總量會隨片段大小的不同而有所變化。
  • 請務(wù)必在訂單上注明PCR所用引物序列，以便用于克隆結(jié)果的核對分析。
  • 當(dāng)克隆結(jié)果中包含合作伙伴提供的單項(xiàng)部分引物序列，我們即視實(shí)驗(yàn)成功，將收取全額的實(shí)驗(yàn)費(fèi)用。
  • 若序列中包含高GC、Poly等特殊或復(fù)雜結(jié)構(gòu)導(dǎo)致測序和中斷，我們即視實(shí)驗(yàn)成功，將收取全額的實(shí)驗(yàn)費(fèi)用。
  • 項(xiàng)目完成一個月后，若合作伙伴無要求返還菌液或質(zhì)粒等，則我們將代為銷毀。

實(shí)驗(yàn)步驟

鑒定樣品DNA片段長度和濃度

1

加“A”尾（若PCR產(chǎn)物已帶“A”尾則跳過此步）

2

PCR產(chǎn)物和pMDI8-T載體連接

3

轉(zhuǎn)化并篩選重組子

4

重組子測序

5

測序結(jié)果分析

6

訂購信息

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